ELISA கிட் ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடியின் திட கட்டம் மற்றும் ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடியின் என்சைம் லேபிளிங் ஆகியவற்றை அடிப்படையாகக் கொண்டது. திடமான கேரியரின் மேற்பரப்பில் பிணைக்கப்பட்ட ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி அதன் நோயெதிர்ப்பு செயல்பாட்டைத் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது, மேலும் ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி என்று பெயரிடப்பட்ட நொதி அதன் நோயெதிர்ப்பு செயல்பாடு மற்றும் என்சைம் செயல்பாடு இரண்டையும் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது. தீர்மானிக்கும் நேரத்தில், சோதனையின் கீழ் உள்ள மாதிரி (இதில் ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜென் அளவிடப்படுகிறது) திடமான கேரியரின் மேற்பரப்பில் உள்ள ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடியுடன் வினைபுரிகிறது. திடமான கேரியரில் உருவாகும் ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகம் கழுவுவதன் மூலம் திரவத்தில் உள்ள மற்ற பொருட்களிலிருந்து பிரிக்கப்படுகிறது.
என்சைம்-லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகள் சேர்க்கப்படுகின்றன, அவை எதிர்வினை மூலம் திடமான கேரியருடன் பிணைக்கப்படுகின்றன. இந்த நேரத்தில், திட கட்டத்தில் உள்ள நொதியின் அளவு மாதிரியில் உள்ள பொருளின் விகிதத்தில் உள்ளது. என்சைம் எதிர்வினையின் அடி மூலக்கூறைச் சேர்த்த பிறகு, அடி மூலக்கூறு நொதியால் வினையூக்கி வண்ணப் பொருட்களாக மாறுகிறது. உற்பத்தியின் அளவு நேரடியாக மாதிரியில் சோதனை செய்யப்பட்ட பொருளின் அளவோடு தொடர்புடையது, எனவே வண்ணத்தின் ஆழத்திற்கு ஏற்ப தரமான அல்லது அளவு பகுப்பாய்வு மேற்கொள்ளப்படலாம்.
என்சைம்களின் உயர் வினையூக்க செயல்திறன் மறைமுகமாக நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியின் முடிவுகளைப் பெருக்குகிறது, மதிப்பீட்டை அதிக உணர்திறன் கொண்டது. ஆன்டிஜென்களை கண்டறிய ELISA பயன்படுத்தப்படலாம், ஆனால் ஆன்டிபாடிகளை கண்டறியவும் பயன்படுத்தலாம்.
ELISA கிட்டின் அடிப்படைக் கொள்கைகள்
இது பொருளை நொதியுடன் இணைக்க ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடியின் குறிப்பிட்ட எதிர்வினையைப் பயன்படுத்துகிறது, பின்னர் அளவு நிர்ணயத்திற்காக நொதிக்கும் அடி மூலக்கூறுக்கும் இடையே வண்ண எதிர்வினையை உருவாக்குகிறது. அளவிடும் பொருள் ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜெனாக இருக்கலாம்.
தீர்மானிக்கும் இந்த முறையில் மூன்று எதிர்வினைகள் அவசியம்:
â திட கட்ட ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி (நோய் எதிர்ப்பு உறிஞ்சி)
â¡ என்சைம் பெயரிடப்பட்ட ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி (மார்க்கர்)
⢠என்சைம் செயல்பாட்டிற்கான அடி மூலக்கூறு (வண்ண மேம்பாட்டு முகவர்)
அளவீட்டில், ஆன்டிஜென் (ஆன்டிபாடி) முதலில் திடமான கேரியருடன் பிணைக்கப்பட்டுள்ளது, ஆனால் அதன் நோயெதிர்ப்பு செயல்பாட்டைத் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது, பின்னர் ஆன்டிபாடி (ஆன்டிஜென்) மற்றும் என்சைம் ஆகியவற்றின் இணை (குறிப்பான்) சேர்க்கப்படுகிறது, இது இன்னும் அதன் அசல் நோயெதிர்ப்பு செயல்பாடு மற்றும் நொதியைத் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது. செயல்பாடு. திடமான கேரியரில் உள்ள ஆன்டிஜெனுடன் (ஆன்டிபாடி) கான்ஜுகேட் வினைபுரியும் போது, என்சைமின் தொடர்புடைய அடி மூலக்கூறு சேர்க்கப்படுகிறது. அதாவது, வினையூக்கி நீராற்பகுப்பு அல்லது REDOX எதிர்வினை மற்றும் நிறம்.
அது உருவாக்கும் நிறத்தின் நிழல் அளவிடப்பட வேண்டிய ஆன்டிஜென் (ஆன்டிபாடி) அளவுக்கு விகிதாசாரமாகும். இந்த வண்ணத் தயாரிப்பை நிர்வாணக் கண், ஒளியியல் நுண்ணோக்கி, எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி ஆகியவற்றால் கவனிக்க முடியும், ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டர் (என்சைம் லேபிள் கருவி) மூலமாகவும் அளவிட முடியும். முறை எளிமையானது, வசதியானது, வேகமானது மற்றும் குறிப்பிட்டது.